為了排除某些因素對(duì)PCR結(jié)果的影響，PCR實(shí)驗(yàn)需要對(duì)照實(shí)驗(yàn)。PCR的陽(yáng)性對(duì)照是Marker，推測(cè)PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度，判斷PCR產(chǎn)物是否是目的片段。PCR的陰性對(duì)照是PCR的空白管，除了模板不加之外，其成分與其他管一樣，證明沒(méi)有其他模板污染。下面讓我們一起來(lái)看看PCR和凝膠電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果常見(jiàn)的問(wèn)題及原因分析吧！一、耗材選擇不當(dāng)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成很大的影響PCR耗材一般都是聚丙烯(PP)材質(zhì)，因其為生物學(xué)惰性材料，表面不易于粘附生物分子，且有著良好的化學(xué)耐性，及溫度耐受性。這些材料通常會(huì)與...

菌種活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)得到純而壯的培養(yǎng)物，即獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物菌種發(fā)酵有一般需要2-3代的復(fù)壯過(guò)程，因?yàn)楸４鏁r(shí)的條件往往和培養(yǎng)時(shí)的條件不相同，所以要活化，讓菌種逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境。下面讓我們一起來(lái)看看細(xì)菌活化的方法吧！一、一般菌種臨時(shí)存放及活化1.低溫保存管應(yīng)存放于-20℃~-80℃之低溫條件下。2.準(zhǔn)備37℃之70﹪酒精浴槽(只能在電氣水浴槽中改放酒精，不可以火加溫，以免危險(xiǎn)；若以37℃水浴取代，應(yīng)避免水中微生物污染...

細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源性基因?qū)氲郊?xì)胞內(nèi)的技術(shù)。那你知道細(xì)胞轉(zhuǎn)染是如何分類(lèi)的嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、根據(jù)導(dǎo)入的核酸存在于宿主細(xì)胞的時(shí)間長(zhǎng)短，可分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染(transienttransfection)：指將精心構(gòu)建的質(zhì)粒通過(guò)一定方式導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，其中所攜帶的外源基因不與細(xì)胞內(nèi)基因組整合。細(xì)胞中外源基因的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)時(shí)間有限，通常僅持續(xù)數(shù)日，直至外源基因由于細(xì)胞分裂過(guò)程中的各種因素而喪失。此方法常用于啟動(dòng)子和其他調(diào)控元件的研究。目前，憑借多種轉(zhuǎn)染試劑的...

細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。既可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，又起到了細(xì)胞保種的作用。那么你知道細(xì)胞凍存的操作步驟是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，要先做好準(zhǔn)備工作：將凍存管、離心管、移液管、移液器等耗材準(zhǔn)備齊全，放入超凈臺(tái)中，打開(kāi)紫外線照射30分鐘。打開(kāi)通風(fēng)機(jī)通風(fēng)3分鐘。用75%酒精擦拭操作臺(tái)和雙手。準(zhǔn)...

蛋白質(zhì)的純化方法蛋白純化是指通過(guò)基因工程技術(shù)將編碼蛋白的核酸序列導(dǎo)入到宿主細(xì)胞，使其大量表達(dá)，再使用適當(dāng)?shù)募兓椒▽⑵湓隗w外純化出來(lái)，從而獲得高純度、活性和產(chǎn)量的蛋白質(zhì)。那么蛋白質(zhì)的純化方法都有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、凝膠層析：根據(jù)分子大小從混合物中分離蛋白質(zhì)，不同蛋白的形態(tài)和分子大小存在差異，在混合物通過(guò)含有填充顆粒的凝膠層析柱時(shí)，由于各種蛋白的分子大小不同，擴(kuò)散進(jìn)入特定大小孔徑顆粒內(nèi)的能力也不同，大的蛋白分子會(huì)被先洗脫出來(lái)，分子越小越晚洗脫。二、離子交換層析：基于...