一、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作對(duì)開展細(xì)胞培養(yǎng)異常重要，工作量也較大，應(yīng)給予足夠的重視，推備工作中某一環(huán)節(jié)的疏忽可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或無法進(jìn)行。準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。二、取材在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞（視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?jīng)過一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的shou次培養(yǎng)稱為原代...

一、工作原理RNA酶保護(hù)法（RNaseProtectionAssay，RPA，以下簡(jiǎn)稱RPA），是近十年發(fā)展起來的一種全新的mRNA定量分析方法。基本原理：將標(biāo)記的特異RNA探針（32P或生物素）與待測(cè)的RNA樣品液相雜交，標(biāo)記的特異RNA探針按堿基互補(bǔ)的原則與目的基因特異性結(jié)合，形成雙鏈RNA；未結(jié)合的單鏈RNA經(jīng)RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待測(cè)目的基因與特異RNA探針結(jié)合后形成雙鏈RNA，免受RNA酶的消化，故該方法命名為RNA酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)。二、RPA法優(yōu)...

新生牛血清是從出生0天至1周內(nèi)或0至30天的新小牛中采集的血液制品，主要用于細(xì)胞培養(yǎng)和疫苗生產(chǎn)等生物制藥領(lǐng)域。在選購(gòu)時(shí)應(yīng)該關(guān)注血源的可追溯性、質(zhì)量認(rèn)證以及適用性；操作時(shí)應(yīng)注意血清的采集、儲(chǔ)存條件和逐步適應(yīng)訓(xùn)練等。新生牛血清的選購(gòu)指南：1.血源可追溯性：選擇來源安全、可追溯的新生牛血清至關(guān)重要。市面上存在較多以假亂真的產(chǎn)品，因此科研工作者需要對(duì)血清的真實(shí)產(chǎn)地、來源進(jìn)行充分了解和鑒別。2.質(zhì)量認(rèn)證：通過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和多項(xiàng)性能測(cè)試。例如，某些特優(yōu)級(jí)胎牛血清會(huì)有多達(dá)70項(xiàng)質(zhì)量測(cè)試，...

一、前言生物制藥是利用生物技術(shù)從組織、細(xì)胞等生物體中分離出有效成分后制備出的用于預(yù)防、治療和診斷的制品，如疫苗，重組蛋白藥等。目前，已開發(fā)出多種生產(chǎn)用的細(xì)胞系，如CHO細(xì)胞、大腸桿菌、VERO細(xì)胞等細(xì)胞系。然而這些通過大腸桿菌，CHO細(xì)胞等培養(yǎng)生產(chǎn)的生物制劑會(huì)含有宿主細(xì)胞殘留DNA等特定的雜質(zhì)，殘留DNA會(huì)引發(fā)潛在的安全問題（如潛在致瘤性、傳染性，甚至增加免疫源性或?qū)е峦蛔儯?，所以相關(guān)的法律法規(guī)相繼出臺(tái)，以對(duì)生物制品中外源宿主DNA殘留量進(jìn)行嚴(yán)格把控。如WHO和美國(guó)FDA現(xiàn)行...

一、DH5αDH5α是大腸桿菌(Escherichiacoli)的一種感受態(tài)細(xì)胞系，通常被用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中。這些細(xì)胞被設(shè)計(jì)成對(duì)外源DNA接受性較高，因此在分子克隆、DNA轉(zhuǎn)化和質(zhì)粒擴(kuò)增等實(shí)驗(yàn)中被廣泛使用。DH5α感受態(tài)細(xì)胞對(duì)于吸收外源DNA特別有效，這使得它們?cè)诨蚬こ毯头肿由飳W(xué)研究中成為常見的實(shí)驗(yàn)室工具。二、操作步驟1、前夜接種受體菌（DH5a或DH10B），挑取單菌落于LB培養(yǎng)基中37℃搖床培養(yǎng)過夜（約16小時(shí)）；2、取1ml過夜培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于100mlLB培養(yǎng)基中，...